PCR儀概述
PCR儀(Polymerase Chain Reaction Instrument)是一種利用聚合酶鏈式反應(PCR)技術,對特定DNA片段進行體外擴增的精密儀器。PCR技術因其高度敏感、高效和高特異性,被廣泛應用于分子生物學、醫(yī)學診斷、遺傳學研究和犯罪學等領域。PCR儀通過精確控制溫度循環(huán),實現(xiàn)DNA的雙鏈分離、引物結合及新鏈合成,從而快速擴增目標DNA片段。
原理
PCR技術的基本原理依賴于DNA雙鏈在高溫下變性成單鏈,低溫下引物與單鏈模板特異性結合,并在適中的溫度下由DNA聚合酶催化合成新鏈。這一過程通過變性、退火和延伸三個步驟的循環(huán)進行,理論上經(jīng)過N次循環(huán),特定DNA片段可擴增至2^N倍。PCR儀作為溫控設備,能夠精確控制每個循環(huán)中的溫度和時間,確保PCR反應的順利進行。
使用方法
實驗準備:準備所需的試劑和儀器,包括模板DNA、引物、dNTPs、緩沖液和酶等,確保所有試劑精確配制并符合實驗要求。
樣品處理:對模板DNA進行純化,去除可能的抑制物,并根據(jù)實驗需求調(diào)整濃度。
反應體系配制:按照實驗手冊或設計方案,精確配制PCR反應體系,確保每種試劑的用量準確。
設置程序:在PCR儀上設置反應程序,包括變性、退火和延伸的溫度及時間,以及循環(huán)次數(shù)。
放入樣品:將配制好的反應體系加入PCR管中,放入PCR儀的相應位置。
啟動反應:啟動PCR儀,按照設定的程序進行反應。
結果分析:反應結束后,通過電泳等方法分析擴增產(chǎn)物,判斷實驗結果。
常見故障及維修方法
溫度不穩(wěn)定
現(xiàn)象:顯示溫度與實際設定不符或無法達到設定溫度。
原因:加熱/冷卻系統(tǒng)故障,如加熱元件、風扇或傳感器損壞。
維修方法:檢查并更換損壞的部件,清潔加熱蓋,保持周圍環(huán)境通風。
反應混合物沉積
漏液
電源問題
程序失敗
現(xiàn)象:程序運行失敗,無法完成預定循環(huán)。
原因:計算機軟件設置錯誤、試劑盒質(zhì)量問題或操作步驟不正確。
解決方法:檢查程序設置,更換新的試劑盒,并按照操作手冊正確操作。
燈泡故障
維護保養(yǎng)
定期清潔:使用無絨布塊蘸取75%酒精清潔儀器表面和樣品臺,保持通風口暢通無阻。
溫度校準:定期檢查PCR儀的溫度準確性,使用溫度驗證試劑盒進行檢測,必要時由專業(yè)人員重新校準。
熱蓋檢查:定期檢查熱蓋是否損壞或密封不良,及時更換或調(diào)整以確保試劑不蒸發(fā)。
樣品槽清潔:定期清洗樣品槽,去除可能的污染物,確保實驗結果準確可靠。
電源管理:在不使用PCR儀時,建議拔下電源插頭,避免長時間待機對儀器造成損害。
記錄管理:及時填寫設備使用記錄,記錄每次實驗的條件和結果,以便追溯和分析。
通過以上措施,可以有效延長PCR儀的使用壽命,提高實驗結果的準確性和可靠性。同時,遇到復雜故障時,建議及時聯(lián)系容濟機電的技術支持或?qū)I(yè)維修人員進行處理。
容濟機電維修過的PCR儀品牌和型號
1、Thermo Fisher Scientific
(1)Applied Biosystems系列:
A、Veriti 96-Well Thermal Cycler
B、SimpliAmp Thermal Cycler
C、ProFlex PCR System
D、QuantStudio 3 Real-Time PCR System
E、QuantStudio 5 Real-Time PCR System
F、QuantStudio 6 Flex Real-Time PCR System
G、QuantStudio 7 Flex Real-Time PCR System
H、QuantStudio 12K Flex Real-Time PCR System
2、Bio-Rad
(1)T100系列:T100 Thermal Cycler
(2)S1000系列:S1000 Thermal Cycler
(3)C1000 Touch系列:C1000 Touch Thermal Cycler
(4)CFX系列:CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System,
CFX384 Touch Real-Time PCR Detection System,
CFX Opus 96 Real-Time PCR System,
CFX Opus 384 Real-Time PCR System,
3、 Eppendorf
(1)Mastercycler系列:Mastercycler Nexus,Mastercycler X50,Mastercycler Pro,Mastercycler Gradient
4、 Roche
(1)LightCycler系列:LightCycler 96 System,LightCycler 480 System II,
LightCycler Nano,LightCycler 1536 Real-Time PCR System
5、Agilent Technologies
(1)SureCycler 8800: 高性能PCR儀
(2)AriaMx Real-Time PCR System: 實時熒光定量PCR系統(tǒng)
6、Qiagen
(1)Rotor-Gene Q: 實時熒光定量PCR系統(tǒng)
(2)QIAquant 96 5plex: 實時熒光定量PCR系統(tǒng)
7、Analytik Jena
(1)Biometra TAdvanced: 高性能PCR儀
(2)Biometra TRobot: 自動化PCR系統(tǒng)
(3)qTOWER3: 實時熒光定量PCR系統(tǒng)
8、Takara Bio
(1)Thermal Cycler Dice Touch: 高性能PCR儀
(2)Thermal Cycler Dice Real Time System III: 實時熒光定量PCR系統(tǒng)
9、Bioer Technology
(1)GeneMax系列:GeneMax
(2)LineGene系列:LineGene 9600 Plus,LineGene K Plus
(3)XP Cycler: 高性能PCR儀
10、Techne (Bibby Scientific)
(1)TC-3000系列:TC-3000 Thermal Cycler,
(2)TC-5000系列:TC-5000 Thermal Cycler
(3)Prime系列:Prime Thermal Cycler,PrimeG Gradient Thermal Cycler
11、Abbott
(1)m2000系列:m2000 RealTime System
12、Cepheid
(1)SmartCycler II: 實時熒光定量PCR系統(tǒng)
(2)GeneXpert系列:GeneXpert Infinity,GeneXpert IV,GeneXpert XVI
13、 Fluidigm
(1)Biomark HD: 實時熒光定量PCR系統(tǒng)
(2)Juno System: 高通量PCR系統(tǒng)
14、Illumina
(1)Eco Real-Time PCR System: 實時熒光定量PCR系統(tǒng)
15、Bioneer
(1)Exicycler 96: 實時熒光定量PCR系統(tǒng)
(2)MyCycler: 高性能PCR儀
16、盛賽爾(Sansure Biotech)
(1)MA-6000系列:MA-6000 Real-Time Quantitative Thermal Cycler
(2)MA-688系列:MA-688 Real-Time Quantitative Thermal Cycler
(3)MA-7000系列:MA-7000 Real-Time Quantitative Thermal Cycler
(4)SLAN系列:SLAN-96P Real-Time PCR System,SLAN-48P Real-Time PCR System
(5)San-Q系列:San-Q5 Real-Time Quantitative Thermal Cycler,
San-Q3 Real-Time Quantitative Thermal Cycler
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